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第三代测序技术是指单分子测序技术，也叫从头测序技术，长读长、无需扩增的特点让它看起来充满吸引力。2023 年，人类基因组端粒到端粒（T2T）完成图登上《Science》封面，三代测序技术正式封神。但不同于二代测序能接受部分降解的 DNA 样本，三代技术对 DNA 完整性极为敏感。此前往往通过传统切胶回收收集目标大片段，但操作繁琐、样本损失大，而磁珠法则难以精准区分大小相近的片段。因此相当大的样本因质检失败从而未进入测序环节，又或者短片段存在过多抢占测序芯片通道，导致有效数据量暴跌，长读长测序的光环之下，暗藏着一场样本质检的生存危机。对三代样本的成功质控是测序成功的关键。

在进行分子生物学实验时，我们经常从众多的分子片段中筛选出目的片段的核酸，从而进行后续的实验研究。最经典的方案是，使核酸在电场的作用下在琼脂糖凝胶中发生分离，然后在紫外光的照射下切取目的片段处的凝胶，进而纯化回收核酸。从琼脂糖凝胶中回收核酸，虽然是一项简单常规实验操作，但是也会存在很多因素影响胶回收的质量( 回收产物的纯度和浓度等)和 DNA 含量，进而直接影响后续的一系列实验的进行，比如：PCR 扩增、酶切连接、转化筛选、测序、标记乃至显微注射等。因此DNA凝胶回收这一步的操作也显得非常重要。

LightBench® 全自动核酸片段回收系统能实现不同片段大小的核酸的全自动富集回收。基于LightBench 的这一功能，可以对游离 DNA 进行片段筛选，提高检测的灵敏度。2020 年，其与 labcrop 合作 AACR 上发表了题为《Size selection of cell-free DNA increases the proportion of tumor specific variants in cancer patients》的应用文献，表明通过片段筛选后，可以将 ctDNA 的信号值平均提升了44%。

我国不是只有大“牌”，在各个行业也有各种各样的实力“小”“牌”。Qsep生物片段分析仪（Bio-fragment Analyzer）就是这样的“小”而不小的“牌”。

准确的分子分析依赖精确的样品定量。本指南旨在帮助研究人员在选择紫外-可见光分光光度法或荧光定量法进行核酸质量控制时做出明智的决策。

在微生物学实验中，测定细菌培养液中的细胞浓度是一项常见的实验。研究人员常透过测量OD600（600nm波长处的吸光值）（Optical Density at 600nm），来快速估算细菌浓度，进而了解细菌的生长曲线。一般来说，实验室观测细菌生长期时，多依靠对培养时间的经验和目测浊度来推断。如果实验需要使用特定生长阶段的细菌，则通过分光光度计进行OD600测量，有助于准确判读细菌细胞浓度和生长阶段。本文将概述OD600测量的原理和应用，并介绍可用于快速进行 OD600 测定的EzDrop 1000C分光光度计。

近年来, 临床诊断技术在医学遗传学中发挥了重要的作用。有研究发现疾病的发生与患者基因组中的基因突变或多态性有直接或间接的关系, 相应的诊断技术也发展到对 DNA 分子进行直接分析的基因诊断技术阶段。

对于分子实验室的科研人员来说，核酸的质量直接影响下游实验的成功与否。毫无疑问，浓度高、纯度高、片段完整的核酸，是实验室人员理想的核酸样品。从组织、细胞、微生物等来源纯化并富集目标核酸，在进一步处理核酸样本前，应先对核酸浓度、纯度、以及核酸片段完整性进行质控。测量浓度是为了符合下游实验的样本需求量；检测纯度是为了确定样本中是否具有其他核酸、蛋白或化学物质的污染；片段完整性则是评判样本是否有降解的关键点。

二代测序技术的飞速发展，大大地提高了样本测序速度，降低了测序成本，也使得应用二代测序方法对 FFPE 样本中的的 DNA 和 RNA 进行测序成为可能。然而由于从 FFPE 样本中提取出的核酸样本比较特殊（有可能降解严重，完整性较差），因此对 FFPE 样本的质控成为文库构建以及能否测序成功的关键。

游离DNA（cell-free DNA，cfDNA）是一种血液或体液中游离于细胞之外的DNA。在某些疾病或特殊状态下，细胞也会释放游离DNA入血，其中包括来源于肿瘤细胞的循环肿瘤DNA（Circulating tumor DNA，ctDNA），来源于胎儿的cfDNA等。随着有效地cfDNA分离技术的出现和发展，cfDNA用于疾病早期诊断、预后评估、疗效监测等方面的潜在价值受到越来越多的关注。检测血浆或血清中cfDNA可视为一种"液体活检"，有利于开展各种相关诊断，并能避免有创的组织活检。以血液为检测标本，使重复采集检测样本成为了可能，从而有利于对疾病的发展及肿瘤的治疗过程进行跟踪监测。

EzDrop 1000 超微量分光光度计，实验室浓度定量的不二选择。

毛细管电泳，引物探针质控

展会回顾 | 全国第七届病原体核酸检测新技术高级培训班

在全球市场都火热关注冠状病毒疫苗研发的情况下，mRNA 疫苗以其特有的优势被各大研究机构广泛研究。

发展功能核酸应用和核酸纳米材料的分子实验室，可选择 Qsep 系列全自动毛细管电泳仪，为科研实验中框架核酸的搭建提供清晰有力的验证。

那提取样品的质量控制如何进行呢? 传统上会对核酸的浓度、纯度以及片段大小进行检测，核酸浓度和纯度一般通过 qubit 和微量分光光度计进行检测，这个标准相对比较常规，不再赘述。另外核酸的片段大小，正常是通过传统的凝胶电泳进行检测，操作相对比较繁琐，另外需要人为判断降解程度，并且需要一致的上样量，染料量以及曝光度才有比较的意义。

肿瘤基因检测(即分子靶标检测)是以研究疾病发生、发展过程中细胞分子生物学上的差异为基础，筛选和鉴定与疾病密切相关的蛋白质、核酸等生物大分子作为药物作用的靶点，通过靶向给药实现有效的靶向治疗及个体化治疗。肿瘤分子靶标的出现使得靶标药物能够针对癌细胞本身进行治疗，不会对正常细胞产生重大伤害，缓解患者病痛的同时更带给他们生的希望。自肿瘤基因检测技术应用以来，治疗效果十分显著，得到了越来越多的癌症患者的认可，是极为有前途的个体化治疗方法。

引物是分子生物学实验中必不可少的部分，它通常是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，核酸聚合酶可由其3’端开始合成新的核酸链。常用的人工合成寡核苷酸探针与引物类似，是一段带有检测标记，且顺序是已知的，与目的基因互补的核酸。

二代、三代测序（NGS）的文库制备，对测序结果的影响很关键，而文库质量的好坏除建库方法和过程细节外，最重要的就是初始样本的质量。如何准确评估分离的核酸样品是否具有足够高的质量？我们将通过以下案例为大家详述。

随着第二代测序(Next Generation Sequencing，NGS) 技术和第三代测序( Third Generation Sequencing，TGS)技术的快速发展，生物研究领域发生了巨大变革。然而，传统的二代测序是从大量细胞中获取足够多的 DNA 或 RNA，因此测序结果是这些细胞整体的表征，而不是单个细胞的具体情况。